Método de réplica (microbiología)

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La replicación es una técnica microbiológica en la que una o más placas de Petri secundarias que contienen varios medios de crecimiento selectivos sólidos (a base de agar) (desprovistos de nutrientes o que contienen inhibidores químicos del crecimiento, como antibióticos) se inoculan con las mismas colonias de microorganismos de la placa de Petri primaria. ., reproduciendo la imagen espacial inicial de la ubicación de las colonias bacterianas entre sí.

Historia

En 1925, Esther y Joshua Lederberg propusieron un método de propagación de colonias.

Lederberg apuntó a usar un paño que se puede esterilizar y también tiene una pila vertical que se asemeja a un "cepillo de alambre" analógico bidimensional, una herramienta clásica de transferencia de colonias.

Inicialmente, se usaban papel y terciopelo de nailon, pero estos revestimientos se descontinuaron debido a una serie de problemas, como que el papel distorsionaba el patrón original de la colonia bacteriana y que el terciopelo de nailon era demasiado caro. Así, se eligió pana de algodón como cubierta para el sello.

El método de réplica encuentra su aplicación en la microbiología tanto de pro-(bacterias) como de eucariotas (levaduras).

Método

Para la transferencia, se utiliza un sello de Lederberg: una tela de terciopelo estéril se estira sobre un cilindro con un diámetro similar al diámetro interior de una placa de Petri. Primero, este sello se presiona contra la placa de Petri original, cubierta de colonias, y luego con colonias aún no cubiertas. Transferir material de cada colonia en el mismo lugar a una placa no germinada que se incuba para hacer crecer las colonias.

Las fibras de pelo aterciopelado evitan que las colonias se manchen. Así, a partir de la placa de Petri (matriz) original cubierta con colonias, se pueden realizar varias impresiones en diversos medios de gel.

Como regla general, se transfieren entre 30 y 300 colonias debido a la dificultad de aislar cada colonia por separado.

Aplicación

El método de réplica se puede utilizar para buscar y aislar mutantes deficientes, es decir, microorganismos que, a diferencia de la cepa original, no son capaces de producir ciertas sustancias necesarias para su crecimiento y reproducción, y por lo tanto dependen de la presencia de estas sustancias en el medio cultural.

Literatura

Arnold Berk, David Baltimore, Harvey Lodish, James Darnell, Paul Matsudaira, S. Lawrence Zipursky: Molekulare Zellbiologie . 2. Auflage, Walter de Gruyter, 1996. ISBN 9783110810578, S. 199

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