N-etilmaleimida

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N-​etilmaleimida
General

Nombre sistemático		 1-​etilpirrol-​2,5-​diona
abreviaturas NEM
nombres tradicionales etilmaleimida
química fórmula C 6 H 7 NO 2
Propiedades físicas
Masa molar 125,12528 g/ mol
Propiedades termales
La temperatura
 •  fusión 43-46°C
 •  hirviendo 210°C
Clasificación
registro número CAS 128-53-0
PubChem 4362
registro Número EINECS 204-892-4
SONRISAS   O=C1\C=C/C(=O)N1CC
InChI   1/C6H7NO2/c1-2-7-5(8)3-4-6(7)9/h3-4H,2H2,1H3HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N
CHEBI 44485
ChemSpider 4209
Los datos se basan en condiciones estándar (25 °C, 100 kPa) a menos que se indique lo contrario.
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La N -etilmaleimida (NEM) es un derivado del ácido maleico . Contiene un grupo funcional imida y es un alqueno activadoque reacciona con los tioles y se usa a menudo para modificar los residuos de cisteína en proteínas y péptidos [1] .

Propiedades químicas

La N -etilmaleimida es un aceptor de Michael . Esto significa que puede agregar nucleófilos como los tioles. El tioéter formado como resultado de tal reacción tiene un enlace C-S muy fuerte y la reacción es prácticamente irreversible. La reacción transcurre a pH 6,5-7,5. La N -etilmaleimida puede reaccionar con aminas o sufrir hidrólisis a un pH más básico. La N -etilmaleimida se ha utilizado ampliamente para determinar el papel funcional de los grupos tiol en enzimología . Es un inhibidor irreversible de todas las cisteína peptidasas, ya que realiza la alquilación de los grupos tiol en el centro activo (ver diagrama) [2] [3] .

Estudios de casos

NEM bloquea el transporte vesicular . Se utilizan tampones de lisis con N -etilmaleimida 20-25 mM para inhibir la desumoilación de proteínas durante la transferencia de Western . NEM también se utiliza como inhibidor de la desubiquitinilación .

Arthur Kornberg y sus colegas usaron N -etilmaleimida para apagar la ADN polimerasa III y comparar su actividad con la ADN polimerasa I. Kornberg recibió el Premio Nobel por el descubrimiento de la ADN polimerasa I, que en ese momento se consideraba la principal polimerasa de la replicación bacteriana . aunque más tarde su hijo Thomas demostró que la principal polimerasa replicativa en bacterias es la ADN polimerasa III, que aún no había sido descubierta en ese momento.

La N -etilmaleimida activa la ingesta dependiente del cloro , insensible a la uabaína, de iones de potasio en los glóbulos rojos de las ovejas y las cabras [4] . Dieciséis años después, este descubrimiento contribuyó al descubrimiento de cotransportadores de K + /Cl- en células embrionarias humanas, que introdujeron isoformas de ADNc de KCC1 [ 5 ] . Desde entonces, la N -etilmaleimida se ha utilizado ampliamente como herramienta de diagnóstico para determinar la presencia de simportes K + / Cl- en las células de varias especies animales [6] [7] [8] [9] .

Notas

  1. ↑ Sondas reactivas de tiol Archivado desde el original el 28 de enero de 2008. en Invitrogen
  2. ↑ Nelson, DL; Cox, MM "Lehninger, Principios de bioquímica" 3ª ed. Vale la pena publicar: Nueva York, 2000.
  3. ↑ Gregory, JD (1955) J. Am. química
  4. ↑ Un flujo de K+ dependiente de cloruro inducido por N etilmaleimida en eritrocitos de ovejas y cabras genéticamente bajos en K+.
  5. ↑ Gillen CM, Brill S, Payne JA, Forbush B 3rd: Clonación molecular y expresión funcional del cotransportador K-Cl de conejo, rata y humano.
  6. ↑ Regulación del cotransporte K-Cl: de la función a los genes.
  7. ↑ Cotransporte de K+ Cl: Sulfhidrilo, cationes divalentes y el mecanismo de activación de volumen en un glóbulo rojo.
  8. ↑ . doi : 10.1016/j.cell.2009.05.031 .
  9. ↑ Jennings, ML y Al-Rohil, NSJ gen. fisiol. 95, 1021-1040, 1990

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