Diagnóstico SPR

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El diagnóstico SPR (de Surface plasmon resonance  - " Surface plasmon resonance ") es un método para determinar las constantes de unión de moléculas pequeñas, basado en el fenómeno de oscilaciones coherentes de electrones libres, que están limitados dentro de la superficie de nanopartículas metálicas (generalmente oro o plata) debido a la radiación de excitación electromagnética en la interfaz metal-dieléctrica [1] . Este fenómeno se denomina resonancia de plasmones superficiales . Sobre la base de la observación de caídas en aquellas regiones del espectro de la dispersión de luz resonante de Rayleigh , donde se adsorbieron las biomoléculas, se concluyó que el efecto de la transferencia cuántica directa de la energía de resonancia de plasmones departículas nanoplasmónicas a biomoléculas adsorbidas [2] . Este efecto es la base de muchos biosensores que permiten observar la interacción de las biomoléculas en tiempo real [3] [4] .

Historia

Los primeros sensores óptico-químicos se basaron en la medición de cambios en el espectro de absorción y fueron desarrollados para medir la concentración de CO 2 y O 2 [5] . Desde entonces, se ha utilizado una amplia variedad de técnicas ópticas en sensores y biosensores químicos, que incluyen elipsometría , espectroscopia (luminiscencia, fosforescencia, fluorescencia, dispersión Raman), interferometría (interferometría de luz blanca, interferometría modal en estructuras de guía de ondas ópticas) y plasmón de superficie. resonancia. En estos sensores, la cantidad deseada se determina midiendo el índice de refracción, la absorción y las propiedades de fluorescencia de las moléculas del analito o del medio de conversión quimioóptico [6] [7] [8] [9] .

El potencial de la resonancia de plasmones superficiales (SPR) para caracterizar películas delgadas [10] y monitorear procesos en interfaces metálicas [11] fue reconocido a fines de la década de 1970. En 1982, Nylander y Lidberg [12] [3] demostraron el uso de SPR para la detección de gases y biodetección . Desde entonces, el sondeo SPR ha recibido una atención cada vez mayor por parte de la comunidad científica. SPR está ganando impulso rápidamente en la cuantificación de laboratorio clínico para inmunoensayo enzimático, detección de mutaciones, monitoreo de fármacos terapéuticos (TDM) y más. En el período 2005-2015, los diagnósticos SPR pasaron de los prismas Kretschmann convencionales a una nueva generación de sensores de fibra con estructuras micro o nano para mejorar SPR [13] .

Resonancia de plasmones superficiales

La resonancia de plasmones superficiales es una fluctuación de densidad de carga que puede existir en la interfaz entre dos medios con constantes dieléctricas de signos opuestos, como un metal y un dieléctrico. La onda de densidad de carga está asociada con una onda electromagnética, cuyos vectores de campo alcanzan su máximo en la interfaz y decaen en ambos medios. Esta onda de plasmón de superficie es una onda polarizada (el vector magnético es perpendicular a la dirección de propagación de la onda de plasmón de superficie y paralelo al plano de separación de fases).

La constante de propagación de una onda de plasmón superficial que se propaga en la interfaz entre un dieléctrico y un metal está determinada por la siguiente expresión:

, donde k denota el número de onda en el espacio libre, la permitividad del metal y el índice de refracción del dieléctrico [14] .

De la expresión se sigue que el oro, la plata y varios otros metales satisfacen la condición [15] .

Principales características de las ondas de plasma superficial en la interfase metal-agua [16]
Plata Oro
Longitud de onda (nm) λ =630 λ =630
Longitud de propagación (µm) 19 3
Profundidad de penetración del metal (nm) 24 29
Profundidad de penetración dieléctrica (nm) 219 162
Concentración de campo en dieléctrico (%) 90 85

Migración de energía de resonancia de plasmones (MEPR)

De acuerdo con las "inmersiones" específicas en los espectros de dispersión, se concluyó que las moléculas de proteína adsorbidas en la superficie de las partículas de oro, por así decirlo, "atraen" una parte de la energía de resonancia del plasmón hacia sí mismas. Así como la energía donante-aceptor se iguala en la transferencia de energía de resonancia de fluorescencia (FRET) entre dos fluoróforos, el proceso PRET requiere que los picos de resonancia de plasmón (Ep) de una nanopartícula metálica se superpongan con las posiciones de los picos de resonancia de electrones (electrón tierra-a). -energía de transición excitada Ee – Eg) biomoléculas. La energía cuantificada probablemente se transfiere a través de la interacción dipolo-dipolo entre el dipolo plasmónico resonante en la nanopartícula y el dipolo biomolecular [17] .

La elección del tamaño y la forma de las nanopartículas (NP) depende de este efecto. Por ejemplo, se ha demostrado que para NP de más de 20 nm, la absorción del plasmón se desplaza hacia el rojo con el aumento del tamaño de la NP debido a la polarización no homogénea de las NP, lo que conduce a la excitación de modos de orden superior. La forma también afecta las propiedades del plasmón [18]. ] . Por ejemplo, las NP metálicas anisotrópicas exhiben dos resonancias de plasmón y un aumento en el campo eléctrico en los extremos de las NP en comparación con una sola resonancia y un campo eléctrico isotrópico que rodea a las NP esféricas [19] .

Sensores SPR

Dado que la longitud de propagación de las ondas de plasmón de superficie (SPW) es muy limitada, la acción sensible se lleva a cabo directamente en la región donde la SPW es excitada por una onda óptica. El sistema óptico usado para excitar el SPR se usa simultáneamente para medir el SPR. Por lo tanto, la sensibilidad de los sensores SPR no puede beneficiarse de una mayor duración de la interacción del sensor, como suele ocurrir en los sensores que utilizan modos controlados de guías de ondas dieléctricas . La constante de propagación de PPW es siempre más alta que la constante de propagación de una onda óptica en un dieléctrico y, por lo tanto, la PPW no puede ser excitada directamente por una onda óptica incidente en una interfaz dieléctrica-metal plana. Por lo tanto, la cantidad de movimiento de la onda óptica incidente debe incrementarse para igualar la cantidad de movimiento del APW. Este cambio de impulso generalmente se logra mediante la reflexión total atenuada en los acopladores de prisma y las guías de ondas ópticas, así como la difracción en la superficie de las rejillas de difracción.

Los sensores SPR suelen utilizar los siguientes enfoques básicos de detección:

1. Medida de la intensidad de una onda óptica cercana a la resonancia [3] [20]

2. Medición del pulso resonante de una onda óptica, incluida la medición de onda angular [21] [22] y SPR [23] [24] [25] .

Sensores de resonancia de plasmones de superficie que utilizan acoplamientos de prisma óptico de reflexión total atenuada

La onda de luz se refleja por completo en la interfaz entre el acoplamiento prismático y una capa delgada de metal (alrededor de 50 nm de espesor) y excita el SSW en el límite exterior del metal, formando un túnel disperso a través de la capa delgada de metal. Todos los enfoques principales para la detección se han demostrado en sensores prismáticos PWV: medir la intensidad de una onda de luz reflejada [12] [3] , medir el ángulo de resonancia de incidencia de una onda de luz [21] [22] , medir la longitud de onda resonante de una onda de luz incidente [26] .

Sensores de resonancia de plasmones de superficie que utilizan acoplamientos de celosía

Si la interfaz metal-dieléctrico se distorsiona periódicamente, la onda óptica incidente se difracta, formando una serie de rayos dirigidos desde la superficie en diferentes ángulos [27] . El componente de momento de estos haces difractados a lo largo de la interfaz difiere del componente de momento de la onda incidente por la multiplicidad del vector de onda de rejilla. Si el componente de momento total a lo largo de la interfaz de orden difractada es igual al componente de pulso PWF, entonces la onda óptica puede combinarse con el PWF.

Se ha demostrado que los sensores SPR ópticos basados ​​en rejillas utilizan la medición de las variaciones de intensidad de la luz en SPR [28] [29] . Un sensor de gas basado en rejilla SPR altamente sensible que utiliza plata como metal activo SPR ha alcanzado una sensibilidad de 1000 Nm RIU-1 (RIU es la unidad de índice de refracción) en modo de medición de longitud de onda [30] en modo de interrogación de ángulo, la sensibilidad del sistema será de unos 100 grados RIU -uno. Para monitorear las interacciones biomoleculares en medios acuosos, se usaron sensores de rejilla SPR basados ​​en oro con una sensibilidad de índice de refracción calculada de 30 grados RIU-1 y 900% RIU-1 en los modos de interrogación angular y medición de intensidad, respectivamente [28] .

Sensores de resonancia de plasmones de superficie que utilizan guías de ondas ópticas

El uso de guías de ondas ópticas en los sensores SPR proporciona muchas características atractivas, como una manera fácil de controlar el sistema del sensor (control efectivo de las propiedades de la luz, supresión del efecto de la luz dispersa, etc.), tamaño pequeño y robustez. El proceso de excitación de PPW en estructuras sensibles a SPR de guía de ondas ópticas es, en principio, similar al proceso de excitación del acoplamiento de Kretschmann. La onda de luz es guiada por una guía de ondas y, al ingresar al área con una fina capa de metal, penetra imperceptiblemente a través de la capa de metal. Si el APW y el modo direccional coinciden en fase, la onda de luz excita el APW en la interfaz metálica exterior. En teoría, la sensibilidad de los dispositivos de guía de ondas SPR es aproximadamente la misma que la de los acoplamientos de reflexión total correspondientes. A pesar de las mayores limitaciones de diseño en comparación con los dispositivos de detección de SPR prismáticos a granel, todos los enfoques principales para la detección de SPR se han implementado en sensores SPR de onda guiada [31] [32] [33] [34] .

Principales aplicaciones de los sensores de resonancia de plasmones de superficie

Sensores de resonancia de plasmones superficiales para medir cantidades físicas

Los sensores SPR se han desarrollado para medir el desplazamiento [35] y la posición angular [36] , que se basan en la sensibilidad del SPR al impulso de la onda de luz incidente. Los fenómenos físicos que ocurren en varios materiales de convertidores ópticos también se han utilizado para desarrollar dispositivos sensibles a SPR, incluido un sensor de humedad que usa cambios inducidos por la humedad en el índice de refracción de capas delgadas porosas y polímeros, y un sensor de temperatura [37] basado en el termo -efecto óptico en silicio amorfo hidrogenado [38] .

Resonancia de plasmón superficial para sondeo químico

Las concentraciones de analitos se pueden determinar midiendo directamente el índice de refracción con un sensor SPR (p. ej., monitoreando los procesos de destilación [39] ), la mayoría de los sensores SPR químicos se basan en la medición de las variaciones de SPR causadas por la adsorción o la reacción química de un analito con un medio de transformación, lo que resulta en un cambio sus propiedades ópticas. Las aplicaciones basadas principalmente en el cambio en el índice de refracción de la capa transductora causado por la adsorción de moléculas de analito incluyen el monitoreo de la concentración de vapores de hidrocarburos, aldehídos y alcoholes por adsorción en películas de polietilenglicol [40] , el monitoreo de vapores de hidrocarburos clorados por adsorción en polifluoroalquilsiloxano [41] , detección de vapores de tetracloroeteno [42] por adsorción en una película de polidimetilsiloxano y detección de vapores de hidrocarburos aromáticos por su adsorción en películas de teflón. Se ha informado sobre un sensor sensible para la detección de NO2 utilizando la quimisorción de moléculas de NO2 en una capa SPR de oro activa [43] .

SPR para biodetección

La primera aplicación de SPR para biodetección se demostró en 1983 [3] . Desde entonces, varios otros grupos han desarrollado la detección de interacciones bioespecíficas [44] . En 1994 apareció el primer estudio sobre métodos de análisis de interacciones bioespecíficas en tiempo real [45] , que desde entonces se utilizan con frecuencia y se mejoran constantemente para estudiar las constantes cinéticas y termodinámicas de las interacciones biomoleculares. En algunos biosensores SPR, el analito se cuantifica mediante la detección directa de la reacción de unión, sin embargo, el aumento del índice de refracción causado por la adsorción de moléculas pequeñas puede no ser suficiente para la detección directa de moléculas [46] . El trabajo anterior se ha centrado principalmente en las interacciones antígeno-anticuerpo, la reacción de estreptavidina-biotina y algunos estudios de IgG, especialmente para probar nuevos algoritmos de ensayo de interacción molecular bioespecífica, caracterizar configuraciones de SPR recientemente desarrolladas y mejorar la química de la superficie. La investigación actual incluye sistemas mucho más avanzados. Una nueva área es el estudio de las interacciones proteína-proteína o proteína-ADN [47] , incluso la detección de cambios conformacionales en una proteína inmovilizada [48] .

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