La cromatografía en papel es un método para analizar la composición de una muestra de prueba. Fue descubierto en 1944 por Conston, Gordon, Martin y Sing [1] , quienes lo utilizaron para analizar mezclas de aminoácidos . Posteriormente, Martin y Sing recibieron el Premio Nobel por su descubrimiento de la cromatografía de partición. En los siguientes 10 años, este método se generalizó mucho, pero a partir de 1952, la cromatografía en papel comenzó a ser reemplazada por un nuevo método de cromatografía en capa fina .(que es esencialmente una generalización del papel). Este último resultó ser más efectivo debido a la mayor velocidad del experimento, la idoneidad para fines preparativos y una mayor capacidad de detección. Por lo tanto, ahora la cromatografía en papel prácticamente ya no se usa y sus métodos no se han mejorado durante mucho tiempo.
La cromatografía en papel, como la cromatografía en general, se puede dividir en partición , adsorción e intercambio iónico , así como preparativa y analítica . En la cromatografía en papel de partición, se pueden distinguir la cromatografía de fase normal y la inversa. En este último caso (en contraste con el enfoque normal), la fase estacionaria es más lipofílica que la fase móvil. Este método se utiliza para separar sustancias lipofílicas.
En la PC distributiva, el portador de la fase estacionaria es la celulosa en forma de hojas de papel , que incluso cuando se seca contiene una cantidad significativa de agua ligada . La distribución ocurre entre el agua unida y el solvente, aunque también están presentes los efectos de adsorción. Para BH se utiliza papel de alta calidad, que se puede modificar de acuerdo con las tareas establecidas. También se utiliza papel de fibra de vidrio , que es resistente a los productos químicos corrosivos y tiene una baja capacidad de adsorción.
Una de las primeras formas de modificar el papel cromatográfico es la acetilación . El papel así obtenido se utiliza para la cromatografía de fase inversa. Posteriormente se comprobó que este papel también es adecuado para separar mezclas racémicas, ya que el propio acetato de celulosa es una sustancia quiral y por tanto los enantiómeros se mueven a través de él a distintas velocidades. Las siliconas también se utilizan como vehículos para la fase lipófila estacionaria .
En la cromatografía en papel, las sustancias se distinguen por su posición relativa en el papel después de que el solvente haya recorrido una cierta distancia. Se aplica una pequeña cantidad de la solución de mezcla (10-20 µl ) a dividir en el punto marcado en el papel y se seca. El punto resultante se llama punto de partida. Luego, el papel se coloca en una cámara sellada y un extremo se sumerge en un solvente, que es la fase móvil. Bajo la acción de las fuerzas capilares , el solvente se mueve a lo largo del papel, disolviendo y arrastrando los componentes de la muestra. Antes de que comience el movimiento, la muestra debe estar completamente disuelta, por lo que la velocidad de disolución de los componentes en la fase móvil es uno de los factores que determinan la eficiencia de separación. Después de que el solvente haya viajado una cierta distancia, la lámina se retira y se seca. Luego se detectan y anotan las manchas formadas, que pueden ser visibles o invisibles.
La relación entre la distancia recorrida por la mancha y la distancia recorrida por el solvente se denota comúnmente como Rf . Este valor depende de la sustancia, el papel y la naturaleza del disolvente. Los cromatogramas en papel pueden aparecer en flujo de solvente ascendente, descendente y horizontal, lo que tiene poco efecto en su calidad. Por lo tanto, la elección está determinada por otros factores: en comparación con la cromatografía ascendente, la cromatografía descendente tiene ciertas ventajas. Es decir, requiere menos tiempo y no está limitado por la duración de la carrera. Por otro lado, para el descenso BX, la cuidadosa preparación de la cámara juega un papel importante, ya que la contaminación o el mal contacto del papel en el punto de contacto con la pared de la embarcación puede dar lugar a una corriente no homogénea y, en consecuencia, , la formación de rayas.
Bush y Crawshaw propusieron la técnica de HD rápida . Esta técnica implica el uso de cámaras más estrechas, cromatografía horizontal, saturación de la atmósfera de la cámara con los vapores del sistema solvente y, lo que es más importante, preimpregnación del papel con una fase estacionaria acuosa. A menudo muy eficaz es el llamado. BH bidimensional , que consiste en que después de la cromatografía en una dirección, el papel se seca y se vuelve a cromatografiar con otro solvente en ángulo recto con la dirección original. Esto a menudo da como resultado la separación de sustancias que no se separan en el primer disolvente.
Las manchas en los cromatogramas se pueden detectar por color , fluorescencia , por reacciones químicas , para las cuales se rocía el papel o se sumerge en varios reactivos , o por radioactividad . La identificación suele realizarse por comparación con muestras con valores de Rf conocidos o por elución , que consiste en recortar la zona que contiene la mancha y luego lavarla con un disolvente adecuado.