Un hibridoma es una línea celular híbrida obtenida por la fusión de dos tipos de células: linfocitos B formadores de anticuerpos obtenidos del bazo de un animal inmunizado (la mayoría de las veces un ratón) y células tumorales de mieloma . La fusión celular se realiza utilizando un agente disruptor de la membrana como el polietilenglicol o el virus Sendai . Dado que las células de cáncer de mieloma son "inmortales", es decir, capaces de dividirse un gran número de veces, después de la fusión y la selección adecuada , un hibridoma productor de anticuerpos monoclonales contra el antígeno puede mantenerse durante mucho tiempo. En 1984, Milstein , Köhler y Jerne recibieron el Premio Nobel de Fisiología o Medicina por el descubrimiento del principio de obtención de anticuerpos monoclonales .
Los animales de laboratorio ( mamíferos como los ratones) se inmunizan, por lo general mediante varias inyecciones de antígeno durante un período de 1 a 2 meses. A continuación, se obtienen células del bazo, a partir de las cuales se aíslan los linfocitos. Se fusionan con células de mieloma, que se eligen para que no produzcan anticuerpos por sí mismas y no tengan el gen de la hipoxantina-guanina fosforribosiltransferasa (HGPT), lo que las hace susceptibles al agente de selección HAT (ver más abajo). La fusión celular se realiza utilizando un agente disruptor de la membrana como el polietilenglicol o el virus Sendai .
Después de la fusión, las células se mantienen durante 10 a 14 días en un medio que contiene HAT ( hipoxantina , aminopterina y timidina ). La aminopterina bloquea la síntesis de nucleótidos, por lo que las células del mieloma materno mueren. A diferencia del mieloma, las células híbridas y los linfocitos B con el gen HHPT sobreviven gracias al uso de hipoxantina como fuente de purinas , pero la vida útil de los linfocitos comunes es limitada y solo las células de hibridoma permanecen en cultivo después de unas pocas semanas. Dado que no todas están formadas por la fusión del mieloma con linfocitos que producen los anticuerpos deseados, las células se dividen en líneas, que se mantienen en celdas separadas de placas de 96 pocillos. A continuación, se determinan los anticuerpos en el medio por encima de las células y se descartan las líneas celulares que no producen anticuerpos o no se multiplican lo suficientemente rápido. Con una dilución suficientemente buena de la suspensión celular, no entra más de una célula híbrida en un pozo, pero para garantizar la calidad y la estabilidad del cultivo, las líneas celulares seleccionadas se pueden clonar nuevamente para que los descendientes de un híbrido produzcan anticuerpos. celular, es decir, son monoclonales [1] .
A continuación, el cultivo de hibridoma clonado se subcultiva del pocillo de la placa de 96 pocillos en recipientes más grandes para su propagación, almacenamiento en nitrógeno líquido y obtención de más anticuerpos para estudios posteriores. Del medio de cultivo se pueden obtener de 1 a 60 µg/ml de anticuerpos monoclonales. Se puede obtener una cantidad mayor inyectando la suspensión celular en la cavidad abdominal de los ratones, donde el hibridoma prolifera como las células cancerosas del mieloma materno, secretando anticuerpos en el líquido intracavitario con la formación de ascitis (acumulación de líquido en la cavidad abdominal).