Isotacoforesis

La isotacoforesis (ITP) es un método para separar diferentes tipos de iones en función de su movilidad en un campo eléctrico . Con ITF, todos los tipos de iones migran en la misma dirección, formando un conjunto de zonas que se encuentran en un estado de equilibrio y se mueven a la misma velocidad.

Fundamentos teóricos del método

El método ITF se basa en un sistema formado por tres electrolitos diferentes , unidos por un contraión común:

Si se hace pasar una corriente eléctrica a través de este sistema , entonces los aniones se ordenarán en serie de acuerdo con su movilidad electroforética, adelantándose en la región del ánodo , cerrándose en la región del cátodo , el resto entre ellos en forma de zonas estrechas con clara concentración. límites. El ancho de las zonas individuales al final del proceso corresponde a la cantidad absoluta de uno u otro anión en la mezcla .

Dado que las zonas individuales están dispuestas en serie. están prácticamente en contacto, por lo tanto, se introduce en la muestra de ensayo un tampón que contiene un anión con movilidad intermedia , cuya zona se integrará en la secuencia resultante y empujará las zonas de los aniones en estudio . Estas zonas auxiliares se denominan espaciadores - separadores, cuyas funciones las realizan los anfolitos portadores utilizados en el método IEF . Una característica del método ITF es que el proceso va acompañado de la concentración de zonas, cuyo efecto conduce a una resolución comparable e incluso superior a la separación por el método IEF . Los resultados de la separación de mezclas por el método ITF se registran en la cinta registradora en forma de gráfico de la medición de tres parámetros:

Instrumentos para isotacoforesis

La isotacoforesis analítica se lleva a cabo en un dispositivo capilar para isotacoforesis, en un capilar de teflón con un diámetro interior de 0,5 mm.

La isotacoforesis preparativa se lleva a cabo en una columna de gel de poliacrilamida .

Aplicación de la isotacoforesis

  1. Separación analítica de alta resolución (μg) de péptidos , proteínas , nucleótidos , ácidos orgánicos , iones metálicos (parcialmente isótopos ).
  2. Separación preparativa de proteínas (d).
  3. Acumulación en forma de zona estrecha de trazas de sustancias (µg) a partir de grandes volúmenes de muestra debido al efecto de la concentración.
  4. Determinación de la movilidad electroforética.

Literatura

K. Geckeler, H. Eckstein. Métodos analíticos y preparativos de laboratorio: Ref. ed.: Perev. con él. — M.: Química, 1994. — 416 p. enfermo.

Véase también