Análisis microbiológico de suelos - análisis de suelos , llevado a cabo para determinar la presencia de bacterias en el suelo, sus tipos y números.
Las muestras de suelo deben tomarse usando núcleos con un diámetro de aproximadamente 10 mm a una profundidad de 10-20 cm Es mejor esterilizar previamente los núcleos en agua hirviendo (100 ° C).
Las muestras deben colocarse en placas de Petri estériles , que luego deben sellarse. La mitad del peso de cada muestra se suele tomar para el análisis químico (el estudio de la concentración de iones que contienen nitrógeno), el resto se destina al análisis microbiológico.
La actividad microbiológica de los suelos puede determinarse por la actividad de proteasa de los microorganismos que viven en el suelo , y la actividad de proteasa de los suelos está determinada por la actividad de las exoenzimas de los microorganismos del suelo y depende de su número y actividad. Las exoenzimas son enzimas secretadas por microorganismos al ambiente externo que descomponen proteínas, polisacáridos y lípidos.
En cajas de Petri con muestras de suelo, es necesario colocar una película fotográfica iluminada cortada en 2-3 fotogramas, previamente remojada en agua durante 10 minutos. El agua debe esterilizarse previamente hirviéndola durante 10 minutos (100 °C). También es mejor colocar un fragmento de película en una placa de Petri estéril vacía (control) para comparar los resultados obtenidos con el control al final del experimento y minimizar el riesgo de errores.
A continuación, las muestras de suelo deben mantenerse a temperatura ambiente (20 °C) durante 9 días. Luego, la película debe retirarse con cuidado y lavarse con agua corriente, luego secarse. Después de eso, debe calcular el porcentaje de la capa de emulsión "comida" en la paleta. Cuanto mayor sea el porcentaje de destrucción de la capa de emulsión, mayor será la actividad exoenzimática del suelo.
Una característica de la tinción de Gram es la proporción desigual de varios microbios a colorantes del grupo trifenilmetano: violeta de genciana, violeta de metilo , violeta cristal. Los microbios que pertenecen al grupo grampositivo dan una fuerte conexión con los colorantes y el yodo indicados . Los microbios teñidos no se decoloran cuando se exponen al alcohol , por lo que, cuando se tiñen adicionalmente con fucsina , los microbios grampositivos no cambian el color púrpura adoptado originalmente. Los microorganismos gramnegativos forman con genciana, cristal o violeta de metilo y yodo, un compuesto que se destruye fácilmente por la acción del alcohol, por lo que se decoloran y luego se tiñen con fucsina, adquiriendo un color rojo. La relación de microorganismos a la tinción de Gram tiene un gran valor diagnóstico.
Se debe inocular una pequeña cantidad de muestra de suelo en placas de Petri de agar de algas usando un asa microbiológica, luego las placas de Petri inoculadas se deben mantener a temperatura ambiente durante 9 días. También es mejor hacer una inoculación de control desde el aire para luego comparar las colonias de microorganismos cultivadas en diferentes placas de Petri, y saber qué microorganismos podrían provenir del aire y no del suelo.
Coloque una gota de agua destilada en un portaobjetos de vidrio limpio y sin grasa, luego agregue una pequeña cantidad de cultivo microbiano cultivado en agar usando un asa microbiológica. A continuación, debe hacer trazos y fijarlos en la llama. Es mejor hacer 2-3 frotis para cada muestra de suelo y un frotis de control.
La tinción de Gram de los microorganismos debe realizarse de la siguiente manera:
Resultado de la tinción: las bacterias grampositivas se tiñen con el tinte principal en un color púrpura oscuro, las bacterias gramnegativas, al percibir un color adicional, adquieren un color carmesí brillante.