La cromatografía de exclusión por tamaño o filtración en gel (cromatografía de tamiz, permeación en gel, filtración en gel) es un tipo de cromatografía durante la cual las moléculas de sustancias se separan en tamaño debido a su diferente capacidad para penetrar en los poros de la fase estacionaria. En este caso, las moléculas más grandes (de mayor masa molecular ) que son capaces de penetrar en el mínimo número de poros de la fase estacionaria son las primeras en salir de la columna. Las sustancias con tamaños moleculares pequeños, que penetran libremente en los poros, salen en último lugar. A diferencia de la cromatografía de adsorción , durante la filtración en gel, la fase estacionaria permanece químicamente inerte y no interactúa con las sustancias a separar.
Se introduce una solución de muestra en la columna , cuyo volumen es limitante para la calidad de la cromatografía. Para separaciones analíticas, no debe superar el 0,1 % del CV (volumen total de la columna), y para la purificación preparativa, no debe superar el 8-10 % del CV. La columna está llena de polvo, cuyas partículas o gránulos tienen poros de un cierto diámetro. Las sustancias macromoleculares que no están incluidas en los poros pasan entre los gránulos, por lo que su volumen de retención es igual al volumen de la columna menos el volumen de la fase estacionaria (el llamado volumen libre ). Eluyen primero. Las moléculas de tamaño mediano caben en los poros del adsorbente, pero no completamente. Por lo tanto, su volumen de retención es ligeramente superior al volumen libre. Eluyen en segundo lugar. Las moléculas más pequeñas entran libremente en los poros junto con las moléculas de disolvente. Por lo tanto, su volumen de retención en la columna es mucho mayor que el volumen libre y se acerca al volumen total de la columna (es decir, 100% CV). Eluyen en último lugar.
El gel es un sistema heterogéneo en el que la fase móvil (generalmente agua) está siempre dentro de los poros de una fase estacionaria o sólida, llamada matriz de gel.