Columna cromatográfica - un dispositivo para la cromatografía , utilizado tanto para el trabajo manual y como parte de una unidad especial, un cromatógrafo .
En una columna cromatográfica, la mezcla multicomponente inicial se separa en una serie de mezclas binarias que consisten en un líquido o gas portador (para cromatografía de gases ) y uno de los componentes a separar. La separación puede ocurrir tanto debido a la formación de enlaces temporales entre las sustancias a separar y la fase estacionaria de la columna ( cromatografía de adsorción ), como de acuerdo con otros principios (por ejemplo, cromatografía de exclusión por tamaño ). Más precisamente, los valores de volumen o tiempo de salida de cada componente de la columna se establecen durante la calibración .
La columna se caracteriza por el material del que está compuesta la fase estacionaria, el diámetro interno y la longitud. El tamaño de las columnas depende de la cantidad de sustancias a separar y del tipo de cromatografía. En columnas de diferentes calibres, se pueden separar tanto microgramos como kilogramos de diversas sustancias.
Hay dos métodos principales para rellenar columnas con sólidos, seco y húmedo. En el primer caso, la columna se llena primero con polvo seco, después de lo cual se hace pasar la fase móvil (líquida o gaseosa). En el segundo caso, la columna se llena con una suspensión de relleno en la fase móvil. Si la fase móvil es líquida, en ambos casos se debe asegurar que no haya burbujas de aire en la columna terminada, lo que puede afectar la calidad de la cromatografía o bloquearla por completo. Además, siempre existe el riesgo de fallo de la columna por sustancias inadmisibles (sustancias insolubles o moléculas demasiado activas que obstruyen el canal de la columna) que no se eliminan durante la preparación de la muestra .
Como fase sólida, se pueden usar materiales tales como gel de sílice , alúmina , celulosa microcristalina , agarosa y otros materiales, en particular, preparados mediante procesamiento especial de celulosa o agarosa para cromatografía de exclusión por tamaño , intercambio iónico o afinidad .
Durante la cromatografía, los componentes individuales de la mezcla aplicada a la columna salen de ella a diferentes velocidades. Se recogen por fracciones, determinando la concentración de las sustancias esperadas en cada fracción. Las sustancias coloreadas también se pueden ver a través de las paredes de vidrio de la columna.
| Métodos de separación química | |
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