| Taq polimerasa | |
|---|---|
| Taq polimerasa en complejo con ADN | |
| Notación | |
| simbolos | polA |
| AP | 1BGX |
| UniProt | P19821 |
| Otros datos | |
| Código KF | 2.7.7.7 |
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La polimerasa Taq , o ADN polimerasa I termoestable , es una ADN polimerasa dependiente de ADN termoestable de la bacteria Thermus aquaticus . La polimerasa Taq es un homólogo de la ADN polimerasa I de Escherichia coli [1] . A diferencia de E. coli , Th. aquaticus es un microorganismo termofílico (la temperatura ambiente de 55 °C y superior es óptima para su vida), por lo tanto, sus enzimas son termoestables (la temperatura óptima es de 70–80 °C) [2] . La polimerasa Taq tiene actividades de ADN polimerasa y 5',3'- exonucleasa y se usa para la reacción en cadena de la polimerasa (PCR).
La polimerasa Taq se caracterizó por primera vez en 1976 [3] . Esta enzima consta de 832 residuos de aminoácidos y tiene un peso molecular de alrededor de 94 kDa [4] .
Una propiedad clave de la polimerasa Taq que la hace adecuada para PCR es la estabilidad térmica. La vida media de la enzima a 92,5 °C es de 130 minutos, lo que permite múltiples ciclos de PCR sin necesidad de añadir una nueva porción de la enzima en cada ciclo (como se hacía antes del descubrimiento de las ADN polimerasas termoestables). Además, una temperatura óptima más alta para que se produzca la reacción de amplificación reduce la probabilidad de formación de estructuras secundarias y terciarias en la matriz y la hibridación no específica de los cebadores [2] .
La velocidad de la enzima depende de la temperatura y es de aproximadamente 60 nucleótidos por segundo a 72 °C. Esto es mayor que la velocidad del fragmento de Klenov a su temperatura óptima y se debe en parte al hecho de que la Taq polimerasa no tiene la actividad correctora de la exonucleasa 3',5', que ralentiza la enzima. La polimerasa Taq tiene una mayor procesividad que el fragmento de Klenov y sintetiza fácilmente fragmentos de ADN de 4000 residuos de nucleótidos de longitud, y en condiciones óptimas, hasta 8000-10 000 [2] .
La polimerasa puede agregar un nucleótido sobresaliente en 3' a los extremos romos del fragmento de ADN. Esta propiedad de la enzima se utiliza para la clonación molecular [2] .