Fragmento de Klenov

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El fragmento de Klenow es un  gran fragmento de proteína resultante de la escisión enzimática de la ADN polimerasa I de Escherichia coli por la proteasa subtilisina. El fragmento Klenow se describió por primera vez en 1970 y tenía actividad polimerasa 5' → 3' en combinación con actividad exonucleasa 3' → 5' (corrector), pero no tenía actividad exonucleasa 5' → 3' [1] .

Otros fragmentos más pequeños resultantes de la digestión enzimática podrían tener actividad 5' → 3'-exonucleasa, pero carecían de las dos actividades características del fragmento Klenow.

El fragmento Klenow se usó como ADN polimerasa en los primeros métodos de reacción en cadena de la polimerasa [2] y solo después de un tiempo fue reemplazado por una polimerasa Taq termoestable [3] .

Actualmente se utiliza para el etiquetado de ADN ("rellenar" los extremos cortos de 3' con "hexámeros aleatorios"), para la secuenciación de ADN mediante el método de Sanger y para la síntesis de ADN de segunda cadena .

Notas

  1. ↑ Klenow H y Henningsen I. Eliminación selectiva de la actividad exonucleasa de la polimerasa del ácido desoxirribonucleico de Escherichia coli B mediante proteólisis limitada   // Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América  : revista. - 1970. - vol. 65 . - pág. 168-175 . -doi : 10.1073/ pnas.65.1.168 . —PMID 4905667 .
  2. ↑ Saiki R. K. et al. Amplificación enzimática de secuencias genómicas de globina β y análisis del sitio de restricción para el diagnóstico de anemia de células falciformes  (inglés)  // Science: journal. - 1985. - vol. 230 . - P. 1350-1354 . -doi : 10.1126 / ciencia.2999980 . —PMID 2999980 .
  3. ↑ Saiki et al. Amplificación enzimática de ADN dirigida por cebador con una polimerasa de ADN termoestable  (inglés)  // Ciencia: revista. - 1988. - vol. 239 . - Pág. 487-491 . -doi : 10.1126 / ciencia.2448875 . —PMID 2448875 .