Un analizador hematológico es un dispositivo (un conjunto de equipos) diseñado para realizar estudios cuantitativos de células sanguíneas en laboratorios de diagnóstico clínico. Puede ser automático o semiautomático.
Un analizador hematológico semiautomático se diferencia de uno automático en que el proceso de dilución de una muestra de sangre se lleva a cabo mediante un dispositivo separado: un diluidor. Después de preparar la dilución de sangre completa, el operador debe transferir la muestra diluida al módulo de medición.
Actualmente, prácticamente no se producen analizadores semiautomáticos.
El Analizador Automático de Hematología es un instrumento totalmente automatizado en el que todo el proceso analítico se realiza de forma automática.
Los analizadores automáticos modernos son capaces de procesar docenas de muestras (de 60 a 120) por hora, con precisión y reproducibilidad según las especificaciones, además de almacenar los resultados de las pruebas en la memoria integrada y, si es necesario, imprimirlos en la memoria integrada. impresora térmica o una impresora externa.
Los analizadores hematológicos modernos se clasifican de acuerdo con la nomenclatura de los indicadores determinados de células sanguíneas.
Los analizadores de hematología de ocho parámetros determinan los siguientes parámetros: concentración de eritrocitos (RBC), leucocitos (WBC), plaquetas (Plt), hemoglobina (Hb), así como los siguientes parámetros de eritrocitos: el volumen promedio de eritrocitos (MCV), el contenido medio de hemoglobina en los eritrocitos (MCH), la concentración media de hemoglobina en los eritrocitos (MCHC), el hematocrito (Hct).
Los analizadores hematológicos de ocho parámetros prácticamente no se fabrican en la actualidad.
Analizadores hematológicos clase 3-diff . Los analizadores hematológicos de clase 3-dif, según el modelo producido, le permiten determinar de 16 a 22 indicadores de células sanguíneas.
Los analizadores de esta clase, además de los parámetros que determinan los analizadores de ocho parámetros, determinan tres subpoblaciones de leucocitos: la concentración de linfocitos (Lm), granulocitos (Gr) y los denominados leucocitos medios (Mid), así como su porcentaje Lm%, Gr% y Mid%. De ahí el nombre de la clase 3-dif. Además, los analizadores hematológicos de esta clase determinan el coeficiente de variación del volumen de eritrocitos (RDW) y una serie de indicadores que caracterizan las plaquetas: el volumen plaquetario promedio (MPV), la proporción del volumen plaquetario (Tct) (análogo al hematocrito), el coeficiente de variación del volumen plaquetario (PDW).
La información de diagnóstico importante, que se puede obtener mediante analizadores hematológicos de esta clase, son las funciones de distribución por volumen de eritrocitos, leucocitos y plaquetas: histogramas.
Analizadores hematológicos clase 5-dif. La principal diferencia entre los analizadores de hematología 5-dif y los analizadores 3-dif es su capacidad para detectar las 5 subpoblaciones de leucocitos: linfocitos (Lym), monocitos (Mon), neutrófilos (Neu), basófilos (Bas) y eosinófilos (Eos), así como su contenido porcentual de Lym%, Mon%, Neu%, Bas% y Eos%. El método de recuento de impedancia, también conocido como contador Coulter , utilizado en los analizadores de 3 diferencias no es capaz de distinguir entre neutrófilos, basófilos y eosinófilos, por lo que se utiliza un método diferente de diferenciación celular en los analizadores de 5 diferencias. Se basa en el principio de la difracción de la radiación láser en las células leucocitarias y en el análisis posterior de la radiación dispersa. Los leucocitos "promedio" no difieren en tamaño lo suficiente como para ser distinguidos por el método de impedancia, pero tienen una estructura interna diferente e interactúan de manera diferente con los colorantes. Y el método de detección de un patrón de difracción resulta ser sensible a la estructura interna de las células. Por lo tanto, los eritrocitos y las plaquetas se cuentan con un contador Coulter y los leucocitos con una unidad láser separada.
Cualquier analizador de hematología moderno es un complejo de sistemas mecánicos, hidráulicos, neumáticos y de medición. Los sistemas hidráulicos y neumáticos se encargan de tomar los reactivos de los contenedores, transportar la muestra y los reactivos dentro del analizador y eliminar los desechos del analizador. El sistema mecánico se encarga de mover el muestreador o automuestreador, según el modelo, así como de controlar la válvula corredera y varios agitadores [1] .
El método para determinar la hemoglobina es común para todos los tipos de analizadores. Consiste en el análisis de la densidad óptica a la longitud de onda requerida de la sangre lisada. La secuencia de operación del analizador para medir la hemoglobina es la siguiente:
La densidad óptica de la muestra lisada será proporcional al contenido de hemoglobina en la sangre de prueba.
Cada analizador de hematología generalmente está diseñado para su propio sistema de reactivos, pero hay muchas similitudes entre ellos.
Los componentes principales de los kits de reactivos para analizadores de hematología son: diluyente isotónico ( diluyente ), solución de lisis (hemolítica), solución de enjuague y solución de limpieza.
Dependiendo del diseño específico del analizador, solo una parte de los reactivos especificados puede incluirse en el kit básico.
Un diluyente isotónico es una solución tampón con pH , conductividad y osmolaridad fijos . La palabra isotónico indica solo una y no la propiedad más importante del reactivo: mantener la presión osmótica requerida para garantizar la constancia del volumen de células sanguíneas. El hecho es que los eritrocitos toman el volumen que les dicta la osmolaridad de la solución. Con un aumento en la osmolaridad, dentro de 3:5 segundos, los eritrocitos se comprimen a un cierto volumen de equilibrio. Si la osmolaridad de la solución disminuye, el volumen de glóbulos rojos aumenta en consecuencia. Por tanto, el volumen celular medio (MCV) está relacionado con la osmolaridad del diluyente isotónico. Los aditivos estabilizadores en un diluyente isotónico deben garantizar la seguridad de las células sanguíneas durante un tiempo suficientemente largo en la primera dilución de sangre. La presencia de un anticoagulante en la solución debería prevenir eficazmente la formación de coágulos de fibrina y la agregación plaquetaria. En el caso de los analizadores de hematología que diferencian los leucocitos en tres poblaciones, el diluyente isotónico contiene aditivos especiales que modifican las membranas de los leucocitos. En este caso, el diluyente isotónico debe usarse junto con el lisante apropiado. Hay que tener en cuenta que para todos los analizadores hematológicos con diferenciación de leucocitos en tres poblaciones, el modo estándar es trabajar con sangre total. En la variante de trabajo con predilución, el tiempo de reposo de la muestra de sangre en la primera dilución, según las instrucciones del fabricante, no debe exceder los 30...60 minutos, lo que es difícil de implementar en la práctica de los laboratorios rusos, que utiliza principalmente el modo de predilución. Sobre la base de los requisitos de la práctica de los laboratorios domésticos, se ha desarrollado especialmente un diluyente isotónico único, en el que la diferenciación de los leucocitos se mantiene hasta 3 horas de muestras de sangre en reposo en la primera dilución.
Otro reactivo esencial es una solución de lisis ( hemolítica ), que cuando se agrega a una dilución de sangre produce la lisis de los glóbulos rojos y al mismo tiempo conserva los glóbulos blancos . Es necesario que la hemólisis de los eritrocitos sea de alta calidad, ya que en el hemolizado se cuentan los leucocitos, que inicialmente son unas 1000 veces menos que los eritrocitos. Para proporcionar estas propiedades, la solución de lisis normalmente contiene una composición compleja de tensioactivos iónicos.
En los analizadores con diferenciación de leucocitos en tres poblaciones, los leucocitos bajo la acción de una solución de lisis cambian de tamaño de modo que las fracciones de linfocitos (el primer pico del histograma de leucocitos, 35 ... 90 cc), granulocitos (el pico más a la derecha del histograma de leucocitos, 120...). En la parte media del histograma (90 ... 120 micras cúbicas), en el área de las llamadas células "medias", se ubican monocitos , basófilos y eosinófilos . Así, el analizador de hematología puede determinar el porcentaje y la concentración absoluta de linfocitos, granulocitos y células "promedio" (monocitos, basófilos y eosinófilos en total) analizando el tamaño de las células. Junto con los factores de preparación de muestras, las propiedades del sistema de reactivos tienen un impacto significativo en la calidad de la diferenciación de leucocitos.
Las soluciones de lavado no están directamente involucradas en el proceso de medición, pero sus propiedades afectan significativamente la estabilidad de las características analíticas de los analizadores. Un rasgo característico de los analizadores hematológicos que utilizan el principio de Coulter es la presencia de aberturas de conteo de pequeño diámetro. Y, como saben, la sangre contiene una serie de sustancias que tienden a depositarse en la abertura y la superficie interna del sistema hidráulico. Esto conduce gradualmente a bloqueos y resultados erróneos. En algunos casos, el dispositivo simplemente se detiene y requiere una limpieza mayor. Es decir, la calidad de las soluciones de lavado afecta la estabilidad a largo plazo del instrumento.
Las soluciones de lavado son principalmente de tres tipos. El primer tipo son soluciones para el lavado suave de las líneas del analizador entre muestras y no tienen propiedades de limpieza especiales. Estas soluciones contienen sustancias tensioactivas (detergentes). Desafortunadamente, los lavados con detergente hacen poco para eliminar las proteínas. Por lo tanto, las soluciones a base de hipoclorito de sodio se utilizan para eliminar los depósitos de proteínas , el segundo tipo de soluciones de lavado. Estas soluciones son desproteinizantes muy fuertes. Sin embargo, la solución de hipoclorito de sodio es una sustancia muy cáustica, y las piezas de plástico (se agrietan) y de metal (se corroen) no pueden soportar un contacto prolongado con ella. Por lo tanto, es imposible abusar de tales soluciones. Estas soluciones se utilizan principalmente en casos de emergencia cuando es necesario limpiar rápidamente la apertura de conteo, así como para trabajos de servicio.
Una solución moderna al problema del lavado de alta calidad del dispositivo es el uso de soluciones de lavado enzimático. Debido a la presencia de enzimas, estas soluciones eliminan eficazmente las proteínas y otras sustancias adsorbidas en las paredes del sistema hidráulico. Al mismo tiempo, son completamente neutrales y no tienen un efecto dañino en las partes del dispositivo. La dificultad de crear tales soluciones de lavado radica en la bien conocida propiedad de las enzimas de perder rápidamente su actividad. Como resultado, hay relativamente pocos fabricantes de soluciones de lavado enzimático en el mundo.