PCR de transcripción inversa
La versión actual de la página aún no ha sido revisada por colaboradores experimentados y puede diferir significativamente de la versión revisada el 10 de julio de 2020; las comprobaciones requieren 2 ediciones .En biología molecular , la reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa se conoce comúnmente como RT- PCR . RT-PCR es un método para amplificar un fragmento específico de ácido ribonucleico ( ARN ). [una]
Una molécula de ARN monocatenario se convierte en una reacción de transcripción inversa (RT, eng. RT, transcripción inversa ) en ADN complementario ( ADNc ) y luego la molécula de ADN ya monocatenario se amplifica mediante PCR tradicional . La RT-PCR no debe confundirse con la PCR en tiempo real ( Q -PCR ), que a veces también se abrevia incorrectamente como RT-PCR . [2]
Descripción del método
La transcriptasa inversa se utiliza para convertir una secuencia de ARN en ADN complementario :
- 1. Reacción de la primera cadena: El ADN complementario ( ADNc ) se forma en una plantilla de ARNm a partir de dNTP por la enzima transcriptasa inversa. Los componentes de la reacción se mezclan con cebador de ADN y tampón de transcriptasa inversa durante una hora a 37°C.
- 2. Reacción de la segunda cadena: Una vez que se completa la transcripción inversa y se forma el ADNc en la plantilla de ARNm, los siguientes ciclos se realizan de acuerdo con el método de PCR estándar .
Después de 30 ciclos de amplificación, se generan millones de copias de la secuencia deseada. [2]
Aplicación
La RT-PCR se utiliza para detectar moléculas de ARN en una muestra con una región de secuencia conocida complementaria a un cebador. La amplificación exponencial por RT-PCR es una técnica sensible que puede detectar una pequeña cantidad de moléculas de ARN.
Un ejemplo son los virus de ARN como el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), que es un retrovirus y , por lo tanto, utiliza la enzima VIH -transcriptasa inversa para sintetizar el ADN viral, que luego se integra en el genoma del huésped .
Además, la RT-PCR se utiliza ampliamente para el diagnóstico de enfermedades genéticas y la determinación semicuantitativa de moléculas de ARN específicas en una célula o tejido como indicador de la expresión de los genes correspondientes [3] .
Véase también
Notas
- ↑ Hunt M. (2006) Tutorial de PCR en tiempo real - Copyright 2006, Junta de Síndicos de la Universidad de Carolina del Sur . Consultado el 20 de octubre de 2009. Archivado desde el original el 4 de octubre de 2009.
- ↑ 1 2 Glik B., Pasternak J. Biotecnología molecular. Principios y aplicación. - Moscú: Mir, 2002. - 589 p. — ISBN 5030033289 .
- ↑ Bustin SA Journal of Molecular Endocrinology, 25 // Cuantificación absoluta de ARNm mediante ensayos de reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa en tiempo real . - 2000. - Págs. 169-193.
Literatura
- Glick B., Pasternak J. Biotecnología molecular. Principios y aplicación. - Moscú: Mir, 2002. - 589 p. — ISBN 5030033289 .
 diccionarios y enciclopedias |
|---|