Amplificación mediada por enzimas de mellado

La reacción de amplificación de la enzima de corte ( NEAR) es un método de amplificación de ADN in vitro similar a la reacción en cadena de la polimerasa ( PCR) .  La replicación del ADN ocurre a una temperatura constante utilizando una polimerasa (y una enzima de corte ) para amplificar exponencialmente el ADN en un rango de temperatura de 55 °C a 59 °C.

Las ventajas potenciales de NEAR sobre PCR son una mayor velocidad y menores costos de energía, características compartidas con otros esquemas de amplificación isotérmica [2] . La principal desventaja de NEAR en comparación con la PCR es la formación de productos de amplificación no específicos, que es un problema común para las reacciones de amplificación isotérmica [3] .

La reacción NEAR utiliza endonucleasas naturales o endonucleasas modificadas que introducen una rotura de hebra en una sola hebra en el sitio de escisión del ADN de doble hebra. La capacidad de algunas de estas enzimas para catalizar la amplificación isotérmica del ADN se ha descrito, pero no se ha reivindicado, en las patentes emitidas para las propias enzimas [4] [5] .

La amplificación mediada por una enzima de corte se está utilizando para crear biosensores [6] [7] .

Véase también

• reacción en cadena de la polimerasa
• ADN
• Inmuno-PCR
• Uso del ADN en la tecnología.
• Métodos de secuenciación de última generación
• Secuenciación
• secuenciación de ARN
• Tecnología SlipChip
• electroforesis
• electroforesis de ADN
• FastPCR
• PCR en tiempo real

Notas

1. ↑ Tyumentsev A.I., Tyumentseva M.A., Akimkin V.G. Sistema CRISPR-Cas para la detección del ADN del virus John Cunningham (JCPyV) en concentraciones ultrabajas. Patente de invención . - M. : Servicio Federal de Propiedad Intelectual, 2021. - 21 p.
2. ↑ Zanoli L., Spoto G. Métodos de amplificación isotérmica para la detección de ácidos nucleicos en dispositivos microfluídicos   // Biosensores . - 2012. - vol. 3 , edición. 1 . — págs. 18–43 . — ISSN 2079-6374 . -doi : 10.3390/ bios3010018 . Archivado desde el original el 12 de febrero de 2022.
3. ↑ Eric Tan, Barbara Erwin, Shale Dames, Tanya Ferguson, Megan Buechel. Amplificación de ADN isotérmica específica versus no específica a través de la polimerasa termófila y actividades de enzimas de corte   // Bioquímica . - 2008. - Vol. 47 , edición. 38 . — Pág. 9987–9999 . — ISSN 1520-4995 0006-2960, 1520-4995 . doi : 10.1021 / bi800746p . Archivado desde el original el 12 de febrero de 2022.
4. ↑ Patente de EE. UU. 6.191.267. 20 de febrero de 2001.
5. ↑ Patente estadounidense 6.660.475. 9 de diciembre de 2003
6. ↑ Jingguo Xu, Jia Guo, Sarah Wanjiku Maina, Yumeng Yang, Yimin Hu. Un aptasensor para Staphylococcus aureus basado en la reacción de amplificación de enzimas de corte y amplificación de círculo rodante  //  Bioquímica analítica. - 2018. - Vol. 549 . — pág. 136–142 . -doi : 10.1016/ j.ab.2018.03.013 .
7. ↑ Ruo-Nan Zhao, Li-Ping Jia, Zhe Feng, Rong-Na Ma, Wei Zhang. Aptasensor de electroquimioluminiscencia ultrasensible para la detección de 8-hidroxi-2′-desoxiguanosina basado en la estrategia de amplificación de enzimas de corte y liberación de ADN múltiple inducida por el objetivo  //  Biosensores y bioelectrónica. - 2019. - Vol. 144 . — Pág. 111669 . -doi : 10.1016/ j.bios.2019.111669 .