293 HEK

HEK 293 ( Riñón Embrionario Humano 293 ) es una línea celular derivada de riñones embrionarios humanos .  Debido a su facilidad de cultivo y transfección , se ha generalizado en la biología celular moderna . Además, es ampliamente utilizado en las industrias biotecnológica y farmacológica como productor de proteínas y virus terapéuticos para terapia génica .

Historia

La línea HEK 293 se obtuvo en 1973 por transformación con adenovirus de un cultivo de células renales embrionarias humanas [1] obtenidas de forma abortiva o de un aborto espontáneo (se desconoce el origen) [2] [3] [4] .

El número 293 corresponde a un clon positivo . El análisis posterior mostró que parte del genoma viral se había transformado de manera estable en el cromosoma 19. No se supo durante mucho tiempo qué tipo de célula se transformó. Se ha sugerido que estos pueden haber sido fibroblastos , células endoteliales o epiteliales . Sin embargo, estudios más recientes han demostrado que HEK 293 tiene más propiedades de neuronas indiferenciadas [5] . La comparación del transcriptoma HEK 293 con los transcriptomas de las células renales, suprarrenales y nerviosas determinó que las células HEK 293 son más similares a las células suprarrenales, que a su vez también tienen características de neuronas indiferenciadas. Dado que las glándulas suprarrenales están ubicadas muy cerca de los riñones, es probable que estas células se hayan transformado durante el experimento [6] . Por lo tanto, a pesar del nombre, HEK 293 no debe considerarse como células renales en estudios biológicos. Las células de la línea tienen un cariotipo complejo con un número modal de cromosomas igual a 64, en el que algunos cromosomas están representados por más de dos copias [6] . Entonces, el cromosoma X está representado por tres copias y los cromosomas 17 y 19, por cuatro. Falta el cromosoma Y porque el sexo genético del embrión probablemente era femenino.

Aplicación

Debido a la facilidad de transformación, HEK 293 se ha utilizado ampliamente en estudios de expresión de varios genes y proteínas. Ejemplos de tales estudios son:

• experimentos para estudiar los mecanismos de interferencia del ARN [7] ;
• estudiar la interacción de las proteínas dentro de la célula [8] ;
• estudio del efecto de las drogas en los canales iónicos [9] .

La línea celular HEK 293 se utilizó en el desarrollo de la vacuna Sputnik V [10] . La línea celular HEK 293 también se utilizó durante la fase de I+D de las vacunas de Pfizer y Moderna [11] .

Los HEK 293 más difundidos reciben como células huésped en la propagación de varios vectores virales . Los virus son la forma más eficiente de introducir material genético en las células. Sin embargo, al ser altamente patógenos, los virus pueden presentar cierto riesgo en los experimentos. Este tipo de riesgo puede eliminarse dividiendo el genoma viral en partes y extrayendo de él los genes responsables de la replicación viral. Para replicarse, estos virus modificados requieren una célula huésped que exprese los genes faltantes. Dado que HEK 293 expresa genes adenovirales similares, se pueden utilizar como células huésped adecuadas para la producción de adenovirus [12] . Una modificación celular importante es la línea 293T que contiene el antígeno T SV40 grande , que permite la replicación episomal de plásmidos transfectados con orígenes SV40 . La mayoría de los plásmidos retrovirales y lentivirales modernos utilizados para transfecciones contienen exactamente los orígenes SV40. Por lo tanto, HEK 293T se usa muy a menudo como una línea transitoria para su expresión.

Notas

1. ↑ Graham FL, Smiley J., Russell WC, Nairn R. Características de una línea celular humana transformada por ADN de adenovirus humano tipo 5  //  Journal of General Virology. — Sociedad de Microbiología, 1977. - julio ( vol. 36 , n. 1 ). - Pág. 59-74 . -doi : 10.1099 / 0022-1317-36-1-59 . —PMID 886304 . Archivado desde el original el 24 de febrero de 2021.
2. ↑ Austriaco N. Orientación moral sobre el uso de vacunas COVID-19 desarrolladas con líneas de células fetales humanas . discusión pública . Instituto Witherspoon (25 de mayo de 2020). “Hace unos meses recibí un correo electrónico del profesor Frank Graham, quien creó esta línea celular. Me dijo que, según su conocimiento, el origen exacto de las células embrionarias HEK 293 no está claro. Pueden ocurrir tanto por aborto espontáneo como como resultado de un aborto planeado. De cualquier manera, los abortos que condujeron a las otras tres líneas celulares, o, en el posible caso de HEK 293, un aborto espontáneo, ocurrieron hace varias décadas". Consultado el 23 de diciembre de 2020. Archivado desde el original el 17 de julio de 2021. (indefinido)
3. ↑ Lin YC, Boone M, Meuris L, Lemmens I, Van Roy N, Soete A, Reumers J, Moisse M, Plaisance S, Drmanac R, Chen J, Speleman F, Lambrechts D, Van de Peer Y, Tavernier J, Callewaert N. Dinámica del genoma del linaje del riñón embrionario humano 293 en respuesta a manipulaciones de biología celular  // Nature Communications  . - 2014. - Septiembre ( vol. 5 , no. 1 ). -doi : 10.1038/ ncomms5767 . — PMID 25182477 . Archivado desde el original el 28 de abril de 2022.
4. ↑ Comité Asesor de Vacunas y Productos Biológicos Relacionados. Reunión  // Estados Unidos de América. Administración de Alimentos y Medicamentos. - 2001. - S. 81 . Archivado desde el original el 4 de abril de 2017.
5. ↑ Shaw G., Morse S., Ararat M., Graham FL Transformación preferencial de células neuronales humanas por adenovirus humanos y el origen de las células HEK 293  //  The FASEB Journal. — Federación de Sociedades Americanas de Biología Experimental, 2002. - junio ( vol. 16 , no. 8 ). - Pág. 869-871 . -doi : 10.1096/ fj.01-0995fje . —PMID 11967234 .
6. ↑ 1 2 Lin YC, Boone M., Meuris L., Lemmens I., Van Roy N., Soete A., Reumers J., Moisse M., Plaisance S., Drmanac R., Chen J., Speleman F. , Lambrechts D., Van de Peer Y., Tavernier J., Callewaert N. Dinámica del genoma del riñón embrionario humano 293 linaje en respuesta a manipulaciones de biología celular  // Nature Communications  . - Nature Publishing Group , 2014. - Septiembre ( vol. 5 , no. 8 ). - Pág. 4767 . -doi : 10.1038/ ncomms5767 . — PMID 25182477 .
7. ↑ Amar L., Desclaux M., Faucon-Biguet N., Mallet J., Vogel R. Control de niveles de ARN inhibitorios pequeños e interferencia de ARN mediante la activación inducida por doxiciclina de un promotor mínimo de ARN polimerasa III  //  Nucleic Acids Res.. - 2006. - vol. 34 , núm. 5 . — P.e37 . -doi : 10.1093 / nar/gkl034 . —PMID 16522642 .
8. ↑ Li T., Paudel HK La glucógeno sintasa quinasa 3beta fosforila el Ser396 específico de la enfermedad de Alzheimer de la proteína tau asociada a los microtúbulos mediante un mecanismo secuencial   // Bioquímica . - 2006. - marzo ( vol. 45 , no. 10 ). - Pág. 3125-3133 . -doi : 10.1021/ bi051634r . —PMID 16519507 .
9. ↑ Fredj S., Sampson KJ, Liu H., Kass RS Base molecular del bloque de ranolazina de los canales de sodio mutantes LQT-3: evidencia del sitio de acción   // Br . J Pharmacol.. - 2006. - mayo ( vol. 148 , n. 1 ). - P. 16-24 . - doi : 10.1038/sj.bjp.0706709 . —PMID 16520744 .
10. ↑ Los creadores de Sputnik V respondieron a una solicitud de la Iglesia Ortodoxa Rusa sobre los componentes de la vacuna. Archivado el 11 de noviembre de 2021 en Wayback Machine . Periódico ruso, 11/02/2021.
11. ↑ Preguntaste, respondimos: ¿Las vacunas contra el COVID-19 contienen células fetales abortadas? Archivado el 24 de marzo de 2021 en Wayback Machine Nebraska Medicine, 18/08/2021.
12. ↑ He TC, Zhou S., da Costa LT, Yu  J. , Kinzler KW, Vogelstein B. Un sistema simplificado para generar adenovirus recombinantes  // Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . - 1998. - marzo ( vol. 95 , n. 5 ). - Pág. 2509-2514 . -doi : 10.1073 / pnas.95.5.2509 . —PMID 9482916 .